酶標(biāo)儀選購指南

作為微孔板(bǎn)比色(sè)計的(dí)酶標儀，其基本(běn)功(gōng)能不(bù)外乎一(yī)個(gè)比(bǐ)色(sè)測(cè)定，所不同的是(shì)在測定(dìng)波長範(fàn)圍，吸光度(dù)範圍(wéi)，光學係統，檢(jiǎn)測速度，震(zhèn)板功能，溫度控(kòng)製等方麵的差異。

1.1 測(cè)定波(bō)長(cháng)    

   一(yī)般酶標儀(yí)的(dí)測(cè)定波長在(zài)400~750nm或(huò)800nm之(zhī)間，*可(kě)以滿(mǎn)足(zú)ELISA的顯(xiǎn)色測(cè)定。目前國內常(cháng)見(jiàn)的(dí)ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧(yǎng)化(huà)物(wù)酶(méi)（HRP），底物通常為(wéi)四(sì)甲基聯苯(běn)胺（TMB）和鄰苯(běn)二胺(àn)（OPD），其(qí)在*溶(róng)液的存(cún)在(zài)下，經HRP作用，分別氧(yǎng)化為2,2,-二氨(ān)基(jī)偶(ǒu)氮苯（DAB）和聯(lián)苯醌(kūn)。當(dāng)pH值為5.0左(zuǒ)右時(shí)，DAB在(zài)450nm波(bō)長處有zui大(dà)吸收，當(dāng)pH值(zhí)降(jiàng)為(wéi)L 0時，zui大吸(xī)收波長(cháng)移(yí)至(zhì)492nm,同時摩爾消光(guāng)係數變大(dà)，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸(suān)如(rú)硫酸(suān)或(huò)鹽酸(suān)終(zhōng)止反(fǎn)應。TMB的(dí)氧化產物聯苯醌在波(bō)長450nm處有(yǒu)zui大消(xiāo)光係數(shù)，如(rú)果(guǒ)HRP量少(shǎo)，H:O:和TMB過量(liáng)時，則(zé)形(xíng)成藍色的陽離(lí)子(zǐ)根。降低pH,即(jí)可(kě)使(shǐ)藍色的(dí)陽離子根(gēn)轉變(biàn)為黃(huáng)色的(dí)聯苯醌(kūn)，使(shǐ)用硫酸作為終止劑(jì)可使產物穩(wěn)定(dìng)90min.因此，450nm和(hé)492nm兩(liǎng)個(gè)波長(cháng)是目前ELISA測定zui常用的(dí)。各種酶標儀都配有放置濾(lǜ)光(guāng)片的可自動(dòng)轉換的部件(jiàn)，可(kě)以同(tóng)時安裝6~8片濾光(guāng)片(piàn)，所配備的(dí)濾(lǜ)光片均(jūn)應(yīng)包(bāo)括上述(shù)兩(liǎng)個波(bō)長，有的(dí)酶(méi)標(biāo)儀(yí)以(yǐ)490nm濾(lǜ)光片(piàn)替代492nm濾(lǜ)光(guāng)片(piàn)，影(yǐng)響不大。除了(liǎo)這(zhè)兩個(gè)基(jī)本濾(lǜ)光片外，考慮到(dào)雙波長比色的(dí)需要，還(huán)應(yīng)有620nm或630nm或(huò)650nm和(hé)405nm波(bō)長的(dí)濾光(guāng)片，其他(tā)濾光(guāng)片可根據需要選(xuǎn)擇。有時，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶(méi)標(biāo)儀(yí)作(zuò)微(wēi)量(liáng)生化測(cè)定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠(chǎng)家對(duì)其(qí)生產的酶標(biāo)儀擴展(zhǎn)了(liǎo)紫(zǐ)外檢(jiǎn)測(cè)功能，此(cǐ)時(shí)需(xū)要(yào)一個(gè)340nm波(bō)長(cháng)濾(lǜ)光(guāng)片。此(cǐ)時，酶(méi)標儀(yí)的測定波長範(fàn)圍(wéi)就成(chéng)為340-750nm或800nm。

1.2 測定的(dí)吸光(guāng)度(dù)範圍    

  通常，酶(méi)標儀的吸光度測(cè)定範(fàn)圍在(zài)。0-4之間即可以滿(mǎn)足ELISA的測(cè)定要求(qiú)。在0-4.0範(fàn)圍，綫性(xìng)誤差不(bù)超過(guò)±2.0%，在0.3-3.0吸光度範(fàn)圍內，測(cè)定(dìng)精密度CV小於(yú)±0.2%；3.0-4.0Abs範(fàn)圍(wéi)內，測定精(jīng)密(mì)度CV小於士0.2%。因此(cǐ)，對於酶標(biāo)儀的(dí)吸光度範圍不必去(qù)刻(kè)意(yì)追求大(dà)的吸光度範圍，主(zhǔ)要(yào)看(kàn)看在一(yī)定的吸光度(dù)範圍內的綫性和精(jīng)密度如(rú)何(hé)。

1.3 光學(xué)係統    

  酶(méi)標儀的(dí)光學(xué)係統(tǒng)采用(yòng)的是垂直光(guāng)路多(duō)通道（通常(cháng)為8或(huò)12通(tōng)道(dào)，亦有單通道(dào)）檢測(cè)，一(yī)般為矽光管或(huò)光導纖維，除測定(dìng)通(tōng)道(dào)外(wài)，有(yǒu)的酶標(biāo)儀還有一(yī)個參(cān)比(bǐ)通道，每(měi)次測定(dìng)可(kě)進行自我(wǒ)校(xiào)準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的(dí)光(guāng)學係統功(gōng)能(néng)如何，均可(kě)通過酶標(biāo)儀(yí)測定的(dí)吸(xī)光度範圍，綫(xiàn)性(xìng)度(dù)，精密度(dù)和準(zhǔn)確(què)度等(děng)體(tǐ)現(xiàn)出來(lái)。光學(xué)係統好的(dí)話(huà)，則(zé)上(shàng)述指(zhǐ)標(biāo)也(yě)應(yīng)較佳。測定(dìng)的精密度與測定通道(dào)之(zhī)間的均(jūn)一(yī)性有(yǒu)直(zhí)接(jiē)關係。單通(tōng)道(dào)可(kě)避免因通道不(bù)同所(suǒ)致(zhì)的差異。

1.4 檢測(cè)速度(dù) 

  酶(méi)標(biāo)儀(yí)的檢(jiǎn)測(cè)速度是指(zhǐ)其完成比色測(cè)定(dìng)所需(xū)的時間。檢測(cè)速度快，有利(lì)於提(tí)高(gāo)檢測的精密度(dù)，即避免(miǎn)由於(yú)測定過(guò)程中，因測定時間(jiān)不(bù)同所致的(dí)各微(wēi)孔(kǒng)間吸(xī)光(guāng)度間(jiān)的差異。目前(qián)市場上(shàng)常(cháng)見(jiàn)的(dí)酶標儀檢測速(sù)度都非(fēi)常(cháng)快，通(tōng)常在數(shù)秒(miǎo)鐘內。

1.5 震板(bǎn)功(gōng)能(néng)    

  酶標儀的(dí)震(zhèn)板(bǎn)功能(néng)是指(zhǐ)酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔(kǒng)進行(háng)比色測(cè)定(dìng)前對其進行振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)，使(shǐ)板孔內顏色均一。目前(qián)市(shì)場(cháng)上(shàng)常見的酶(méi)標儀(yí)均有(yǒu)震板(bǎn)功能(néng)，所不(bù)同的是(shì)震(zhèn)板方式(shì)，有(yǒu)的可按上下，左右(yòu)或旋轉(zhuǎn)等(děng)方(fāng)式及振(zhèn)蕩(dàng)幅(fú)度等任(rèn)意調節(jié)。

1.6 溫育(yù)功能

  溫育功(gōng)能是(shì)指(zhǐ)酶標儀本身能(néng)按要求自(zì)動(dòng)地控(kòng)製(zhì)儀(yí)器(qì)內部(bù)的(dí)溫度，使(shǐ)得ELISA測(cè)定中微(wēi)孔板條的(dí)溫(wēn)育過(guò)程(chéng)可(kě)在(zài)儀器(qì)內(nèi)部完成(chéng)，而無需(xū)再(zài)外配溫箱。目前，隻(zhī)有少部分酶(méi)標(biāo)儀具(jù)有此種功能，溫育(yù)功能隻是酶(méi)標儀(yí)的一個附(fù)加(jiā)功能(néng)，是(shì)否具(jù)有並不能說明酶(méi)標儀檔(dàng)次的高低及儀器(qì)的優(yōu)劣。作(zuò)為實(shí)驗(yàn)室(shì)是(shì)否(fǒu)選擇(zé)，則(zé)可根據實驗室的(dí)條件及需要來決(jué)定(dìng)。