定量PCR儀(yí)主要(yào)由(yóu)兩部分組(zǔ)成，一個是(shì)PCR係統，一個是(shì)熒光檢測係統。選擇定(dìng)量(liáng)PCR儀(yí)的(dí)關(guān)鍵(jiàn)——由於定量(liáng)PCR必(bì)需(xū)借助(zhù)樣本和(hé)標準品(pǐn)之(zhī)間的對比(bǐ)來實現定(dìng)量(liáng)的(dí)，對(duì)於定量PCR係(xì)統(tǒng)來(lái)說，重(zhòng)要的參數(shù)除(chú)了(liǎo)傳(chuán)統(tǒng)PCR的溫控性，升降(jiàng)溫速(sù)度等等，更(gēng)重(zhòng)要的還在於樣(yàng)品(pǐn)孔之間的(dí)均一性，以(yǐ)避(bì)免微小的差(chà)別被指數(shù)級放(fàng)大。至(zhì)於熒光檢(jiǎn)測(cè)係(xì)統(tǒng)，多(duō)色多(duō)通道檢(jiǎn)測是當(dāng)今的(dí)主流趨(qū)勢(shì)——儀器(qì)的激發通道(dào)越多，儀器適用(yòng)的熒(yíng)光(guāng)素(sù)種類越(yuè)多，儀(yí)器適用範(fàn)圍(wéi)就(jiù)越(yuè)寬(kuān)；多通道(dào)指可(kě)同時(shí)檢(jiǎn)測一個(gè)樣品中的(dí)多種熒光(guāng)，儀器(qì)就可(kě)以同時(shí)檢測單管(guǎn)內多模版或者(zhě)內標 樣品，通道(dào)越(yuè)多，儀(yí)器適(shì)用範圍越(yuè)寬(kuān)，性(xìng)能就(jiù)更(gēng)*。熒光檢測係統主要(yào)包(bāo)括(kuò)激(jī)發光(guāng)源和檢測器。激(jī)發(fā)光(guāng)源有鹵(lǔ)鎢燈(dēng)光源(yuán)，氬(yà)離子(zǐ)激光(guāng)器(qì)，發(fā)光二(èr)極管LED光源(yuán)，前者可(kě)配多(duō)色(sè)濾光鏡實現不(bù)同激(jī)發波長，而單色(sè)發光二(èr)極(jí)管(guǎn)LED價格低，能耗(hào)少，壽命(mìng)長，不過(guò)因為是單色(sè)，需要(yào)不同(tóng)的(dí)LED才能更好地(dì)實(shí)現(xiàn)不(bù)同激發波(bō)長(cháng)。監測係(xì)統有(yǒu)超低溫(wēn)CCD成像係(xì)統和PMT光(guāng)電(diàn)倍增(zēng)管(guǎn)，前者(zhě)可以一次(cì)對多點成像，後者靈敏度高(gāo)但一次(cì)隻(zhī)能掃(sǎo)描一個樣品，需要通過逐個掃描(miáo)實現多樣(yàng)品(pǐn)檢測(cè)，對於(yú)大量樣品(pǐn)來說需(xū)要較(jiào)長(cháng)的時(shí)間。定量PCR儀需要考慮(lǜ)的(dí)另外(wài)一個(gè)因(yīn)素是軟件設(shè)計，這一(yī)點目前較(jiào)新型號的(dí)儀器(qì)都(dū)有(yǒu)不錯(cuò)的配(pèi)套軟(ruǎn)件可(kě)以滿(mǎn)足常(cháng)規使(shǐ)用。——隨著(zhuó)定(dìng)量PCR技(jì)術(shù)在臨床診(zhěn)斷，疾(jí)病監控，藥物(wù)監(jiān)測，腫瘤(liú)研究(jiū)等(děng)領(lǐng)域的(dí)越來越(yuè)廣(guǎng)泛的應用，市麵上(shàng)不(bù)同(tóng)品牌(pái)和(hé)設計的(dí)定(dìng)量PCR儀也不(bù)斷(duàn)推陳(chén)出新。

1. 傳統(tǒng)的96孔(kǒng)板(bǎn)式(shì)定量PCR儀
傳統的(dí)96孔板式定量(liáng)PCR儀(yí)以美國應用生物(wù)係統公司(sī)(ABI)為(wéi)代(dài)表。傳統96孔(kǒng)板(bǎn)式定量(liáng)PCR儀的優點是可容(róng)納(nà)的樣本量大而(ér)且無需特殊耗(hào)材(cái)，可(kě)以采用傳統的96孔(kǒng)板甚至384孔(kǒng)板(bǎn)進行批(pī)量的(dí)定量反應(yīng)，但(dàn)是(shì)缺點(diǎn)也(yě)顯(xiǎn)而易見——溫(wēn)度(dù)均(jūn)一(yī)性(xìng)不佳——平板固定(dìng)加熱模塊的PCR溫(wēn)度控製有邊緣效(xiào)應(yīng)——樣(yàng)品槽上(shàng)每個孔之(zhī)間的溫(wēn)度存在(zài)差異(yì)——也(yě)就是所謂(wèi)位置效(xiào)應（可參考(kǎo)生物通(tōng)龍(lóng)虎榜：PCR儀(yí)的選擇一文），因此標(biāo)準曲綫的反應條件應難(nán)以做(zuò)到(dào)與樣本*一(yī)致(zhì)，樣本(běn)和樣本(běn)之間的溫度(dù)控製(zhì)也可能存(cún)在差異，對(duì)於靈敏度*的(dí)定(dìng)量PCR來說(shuō)，任(rèn)何(hé)極微小(xiǎo)的差異都會以指(zhǐ)數級別(bié)的(dí)規模被放大，不(bù)能不(bù)說是(shì)一(yī)種(zhǒng)缺(quē)憾。傳(chuán)統(tǒng)反應板麵積(jī)大(dà)，溫度控製的性，升(shēng)降(jiàng)溫速(sù)度(dù)也相對較慢，因而反應(yīng)速度(dù)也較(jiào)慢。96孔(kǒng)板定量(liáng)PCR儀的熒光檢(jiǎn)測分析係(xì)統，由於(yú)96孔板上樣(yàng)品孔(kǒng)的(dí)位置(zhì)是(shì)固(gù)定(dìng)的(dí)，每(měi)個樣品孔距離(lí)光(guāng)源和監(jiān)測器的光(guāng)程(chéng)各(gè)不相(xiāng)同，有可能對(duì)結果產生(shēng)影響(xiǎng)。檢(jiǎn)測在(zài)試(shì)管(guǎn)管(guǎn)底進行，試(shì)管(guǎn)底的(dí)透光性(xìng)和厚(hòu)薄均一(yī)性都(dū)可能對結(jié)果(guǒ)產生(shēng)影(yǐng)響(xiǎng)。MJ和(hé)Bio-Red公(gōng)司的定量(liáng)PCR儀也屬於這一類。

ABI的(dí)7500型(xíng)熒光定量(liáng)PCR儀(yí)激發光源(yuán)為(wéi)鹵鎢(wū)燈(dēng)光源，5色(sè)濾光鏡，可同(tóng)時激(jī)發96個樣(yàng)品，超(chāo)低溫CCD具備同(tóng)時多(duō)點(diǎn)多色檢測的能力(lì)，能夠(gòu)有效地(dì)分辨(biàn)FAM/SYBR Green I, VIC/JOE, NED/ TAMRA/ Cy3, ROX/Texas Red,和Cy5等熒(yíng)光(guāng)染(rǎn)料(liào)。多色熒(yíng)光檢測技(jì)術為多(duō)重定量(liáng)，SNP分析，基(jī)因型分(fēn)型和帶(dài)陽性內對照的陰(yīn)/陽(yáng)性分析提供了基礎(chǔ)。多重定量即在同一(yī)反(fǎn)應管內同(tóng)時對(duì)多個目(mù)標(biāo)基(jī)因(yīn)進行定(dìng)量(liáng)，可以大大提(tí)高(gāo)精(jīng)度並(bìng)節約(yuē)成本。隨(suí)機(jī)配置(zhì)的定量PCR引物和(hé)探(tàn)針設(shè)計(jì)軟件Primer Express非常(cháng)有(yǒu)用，“因(yīn)為到(dào)目前(qián)為止還沒(méi)有(yǒu)其(qí)他軟件有(yǒu)能力設(shè)計定量(liáng)PCR所(suǒ)需的(dí)TaqMan探(tàn)針(zhēn)"。 各型號(hào)都(dū)有(yǒu)實(shí)時動(dòng)態(tài)(Real-Time)和終點讀(dú)板(bǎn)(Plate Read)兩種運行模式(shì)。實時(shí)動態模(mó)式(shì)用(yòng)於定(dìng)量(liáng)DNA或RNA拷(kǎo)貝(bèi)數。可(kě)以(yǐ)動態顯示(shì)PCR擴增(zēng)曲綫的(dí)生成，定量的(dí)綫(xiàn)性(xìng)範(fàn)圍(wéi)大於(yú)9個數(shù)量級，區分5000和10000個拷貝的(dí)DNA模(mó)板(bǎn)可(kě)信度(dù)達99.7%。終(zhōng)點(diǎn)讀板(bǎn)模(mó)式(shì)用(yòng)於(yú)基因(yīn)型(xíng)鑒定(dìng)，點突變檢測和(hé)單核苷(gān)酸多態(tài)性(SNP)分(fēn)析等。當然，也可以(yǐ)作(zuò)為(wéi)普通PCR儀(yí)使用。ABI定(dìng)量(liáng)PCR儀zui大的(dí)優(yōu)勢(shì)在於(yú)ABI已(yǐ)經(jīng)發(fā)布十二(èr)萬(wàn)種Taqman Gene Expression Assays 人(rén)，大鼠，小(xiǎo)鼠(shǔ)基(jī)因組基因(yīn)表達(dá)分析(xī)試劑(jì)盒，覆蓋(gài)人類全(quán)部(bù)4萬(wàn)個基(jī)因(yīn)，二百萬種Taqman Validated SNP Genotyping Assays 人，大(dà)鼠，小鼠(shǔ)基因(yīn)組(zǔ)SNP檢測試(shì)劑盒(hé)，為(wéi)運用7000，7300，7500，7900型開展課題(tí)研究(jiū)創(chuàng)造了的(dí)條件。ABI 的(dí)定(dìng)量PCR儀均(jūn)支持兩種定量化(huà)學：TaqMan熒光探針(zhēn)和SYBR Green I熒光(guāng)染料(liào)。其熔解曲綫(xiàn)(Dissociation Curve)功(gōng)能用(yòng)於(yú)判斷PCR擴增反應(yīng)是(shì)否(fǒu)特異，有(yǒu)無雜帶(dài)生成。7500型號比(bǐ)7300多(duō)一個濾光鏡，新的(dí)光路設計使長波長紅色熒光(guāng)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)靈敏(mǐn)度(dù)大(dà)大提高，帶有(yǒu)快速運行模(mó)式(shì)。增(zēng)強的(dí)7900型在(zài)96孔模塊的(dí)基礎(chǔ)上更(gēng)加(jiā)可(kě)以更換384孔版模(mó)塊，使得高(gāo)通(tōng)量處(chǔ)理數(shù)據(jù)的(dí)能(néng)力大大增(zēng)強，應(yīng)該更(gēng)適(shì)合經(jīng)常處理大量標本的(dí)實驗室。

MJ的Option係列是在MJ原來(lái)的(dí)常(cháng)規PCR儀基礎(chǔ)上改(gǎi)造(zào)，采(cǎi)用(yòng)LED光(guāng)源(yuán)PMT光電倍增(zēng)管(guǎn)熒(yíng)光檢測器。 96個單色(sè)LED光源(yuán)對(duì)應(yīng)96孔板，但是單(dān)色LED激(jī)發波長(cháng)範(fàn)圍較(jiào)窄(zhǎi)。Option是單(dān)道(dào)單(dān)個光電倍增管(guǎn)熒(yíng)光(guāng)檢測器，升(shēng)級(jí)的Option2是雙(shuāng)PMT光(guāng)電倍增管熒光(guāng)檢(jiǎn)測(cè)器，PMT靈敏度(dù)高但(dàn)一次(cì)隻能掃描(miáo)一個樣品(pǐn)，所以Option係列(liè)是逐孔(kǒng)掃描而非(fēi)同(tóng)時(shí)檢測(cè)96個樣品(pǐn)。雙PMT可(kě)同時(shí)進行雙色檢測(FAM/SYBR Green I；VIC/Joe/TAMRA)。優(yōu)勢(shì)之(zhī)一是(shì)帶(dài)梯(tī)度功(gōng)能。Bio-Rad(伯樂)也算(suàn)是個熟悉(xī)的(dí)品牌，iCycler iQ實時定(dìng)量PCR係(xì)統也是96孔平(píng)板式(shì)固定(dìng)加熱的(dí)，熒光檢測波(bō)長範(fàn)圍(wéi)400-700nm，可4波長同時檢測(cè)，儀(yí)器的設計靈活(huó)，定(dìng)性和定(dìng)量部分可(kě)獨(dú)立(lì)工作，同樣(yàng)可完成(chéng)梯度PCR。5組濾光片位置(zhì)使(shǐ)用戶可(kě)以自由(yóu)選擇(zé)不(bù)同的檢測波(bō)長(cháng)。技術(shù)intensifier熒(yíng)光放大器保證了*的(dí)檢(jiǎn)測靈(líng)敏(mǐn)度。MJ被Bio-Rad收購(gòu)後，Option和iCycler iQ目(mù)前(qián)還(huán)是(shì)各自(zì)走(zǒu)各(gè)自(zì)的(dí)銷售渠道，至於將來Bio-Rad會如(rú)何決定二(èr)者(zhě)的(dí)發(fā)展方(fāng)向還需(xū)要拭目以待。

2.創新(xīn)概念的(dí)離心式(shì)實時定量(liáng)pcr儀(yí)
為了克服平(píng)板(bǎn)式定量(liáng)pcr溫度均一性差(chà)的缺(quē)點，聰明(míng)的(dí)研(yán)究(jiū)人員又開發(fā)出創新(xīn)概(gài)念的離(lí)心式(shì)實(shí)時(shí)定量(liáng)pcr儀(yí)，以roche羅(luó)氏(shì)的lightcycle和(hé)corbett的rotor-gene為(wéi)代表。pcr擴(kuò)增(zēng)樣(yàng)品(pǐn)槽(cáo)被巧(qiǎo)妙地設計(jì)為離(lí)心轉(zhuǎn)子(zǐ)的模樣，借(jiè)助(zhù)空(kōng)氣(qì)加熱和轉子在(zài)腔內旋轉，轉(zhuǎn)子(zǐ)上(shàng)每(měi)個孔(kǒng)都是“等位"的，幾(jī)乎無(wú)差(chà)別，很好的解決(jué)了(liǎo)每個(gè)樣(yàng)品孔(kǒng)之(zhī)間(jiān)的溫度均一性的(dí)關(guān)鍵問題——corbett的(dí)rotor-gene樣品間溫度差(chà)異(yì)小(xiǎo)於±0.01℃，zui大程(chéng)度(dù)地保障了標準(zhǔn)曲綫和(hé)樣品之間條(tiáo)件的一致性。利用空(kōng)氣(qì)做(zuò)加熱介(jiè)質(zhì)的優(yōu)點在於(yú)能實現(xiàn)與(yǔ)反應(yīng)體係(xì)無縫(féng)接(jiē)觸，接觸麵(miàn)積大(dà)且加(jiā)熱均(jūn)匀。雖然有競爭(zhēng)對手批(pī)評空氣(qì)介(jiè)質(zhì)比熱小，但(dàn)事實(shí)上(shàng)roche的lightcycle%202.0卻是目前(qián)升溫速(sù)度zui快的(dí)定量pcr儀，可以(yǐ)達到(dào)20℃/秒(miǎo)！Corbett的Rotor-gene也可(kě)以達到5℃/秒(樣品(pǐn)實際(jì)升溫速度達到2.5℃/秒(miǎo))，優(yōu)於(yú)多數的平板式PCR儀(yí)。借(jiè)助旋轉(zhuǎn)離心力還可以隨(suí)時將可(kě)能凝在(zài)管(guǎn)壁和蓋子(zǐ)上(shàng)的(dí)液滴(dī)離(lí)心到管(guǎn)底(dǐ)而無(wú)需(xū)熱(rè)蓋(gài)；還可(kě)以將(jiāng)酶加在管(guǎn)蓋上，升(shēng)溫後離心(xīn)到管底與(yǔ)反(fǎn)應(yīng)體(tǐ)係混(hùn)合，實(shí)現“機械(xiè)的熱(rè)啟(qǐ)動功能(néng)"。由(yóu)於升溫速度快，對於(yú)常規(guī)需(xū)要2個(gè)多(duō)小時完(wán)成的定(dìng)量(liáng)PCR反應，Roche的(dí)LightCycler僅需20—30分鐘即可完成(chéng)，可以大(dà)大(dà)節約時(shí)間和(hé)提(tí)高工作(zuò)效率。這一(yī)點(diǎn)對於(yú)研(yán)究(jiū)人員(yuán)來(lái)說(shuō)極(jí)為(wéi)有用，因(yīn)為你(nǐ)不(bù)再需(xū)要(yào)等(děng)2個多小時(shí)才(cái)能看實驗(yàn)結果了，或(huò)者換句話(huà)來(lái)說(shuō)，2個(gè)多(duō)小時(shí)你可以做(zuò)4—5輪定量實驗了。

由於轉子上(shàng)的(dí)樣品孔是旋轉(zhuǎn)可(kě)移動(dòng)的(dí)，因而離心式熒(yíng)光(guāng)檢測(cè)係統(tǒng)可以固定激發光(guāng)源和(hé)熒光(guāng)檢測(cè)器，隨(suí)時檢測旋轉(zhuǎn)到(dào)跟前的樣(yàng)品管——由於(yú)每(měi)個樣(yàng)品管在(zài)檢測時距(jù)離(lí)檢(jiǎn)測(cè)器(qì)和(hé)激發(fā)光源的距(jù)離都(dū)是“等價"一(yī)樣(yàng)的，使(shǐ)用(yòng)的是(shì)同(tóng)一個(gè)檢測器(qì)和激發光(guāng)源(yuán)，有效減(jiǎn)少不必要(yào)的(dí)係統誤(wù)差(chà)。固(gù)定的結構(gòu)使得(dé)儀器(qì)運行更(gēng)穩(wěn)定，使(shǐ)用壽命更長(cháng)；離(lí)心(xīn)式(shì)定(dìng)量(liáng)PCR都是逐個檢測(cè)樣品(pǐn)的，所以大多采用(yòng)了長壽(shòu)的(dí)LED（發(fā)光二極(jí)管(guǎn)）冷(lěng)光源(yuán)，運行(háng)前(qián)無(wú)須預(yù)熱，無須校正；係統檢(jiǎn)測重復性也(yě)更好(hǎo)。

離心(xīn)式定(dìng)量(liáng)PCR儀的缺點主(zhǔ)要(yào)是離心的轉子小(xiǎo)，能(néng)容納(nà)的樣本量有限，由於(yú)是(shì)離(lí)心式轉子(zǐ)，常規的96孔板(bǎn)和條形管(guǎn)就不(bù)適用，有的(dí)還(huán)需(xū)要特(tè)殊的消耗(hào)品，增加(jiā)使用成本。當然離心式(shì)定量(liáng)PCR儀不可能帶梯(tī)度(dù)功能(néng)。
Roche的(dí)Lightcycler剛(gāng)推出的時(shí)候(hòu)確實讓(ràng)人(rén)眼前一亮！現在(zài)Lightcycler2.0擁(yōng)有令(líng)人心動(dòng)的優點(diǎn)-----
快速：利用空(kōng)氣(qì)動(dòng)力(lì)學(xué)原(yuán)理，20－30分鐘內(nèi)完成(chéng)30－40個循環(huán)。
控(kòng)溫準(zhǔn)確(què)：變(biàn)溫(wēn)速率zui高可達(dá)20℃/秒(miǎo)，溫差(chà)≤±0.3°C
多波長檢測：可同時在530，640及(jí)710nm三個(gè)通道進行檢測，實現同(tóng)管(guǎn)檢測(cè)兩(liǎng)個項目或設立檢測(cè)項目的外(wài)對(duì)照(zhào)和內(nèi)對照。
此外動(dòng)態(tài)檢測(cè)範圍(wéi)達10個數量級(jí)，而(ér)無須將樣品稀(xī)釋；具(jù)有熔點曲綫分(fēn)析功能 可(kě)以鑒(jiàn)別基(jī)因(yīn)型(xíng)，檢(jiǎn)測(cè)點突(tū)變，檢(jiǎn)測(cè)非(fēi)特(tè)異性擴增(zēng)，具(jù)多種檢測(cè)模(mó)式如Taqman探(tàn)針，熒光染料SYBR Green I檢(jiǎn)測，序列特(tè)異(yì)雜(zá)交探針等；探(tàn)針(zhēn)及(jí)引物設(shè)計(jì)方(fāng)便，雜交探針(zhēn)及引物設計的限(xiàn)製少(shǎo)，而且亦(yì)可(kě)方便地選用(yòng)合適大(dà)小的擴(kuò)增子（100-1000bp）。但是(shì)Lightcycler需要使用特定的毛細(xì)管(guǎn)作為樣品(pǐn)管，這(zhè)在某種程度上提高了消(xiāo)耗成本，也不(bù)方(fāng)便(biàn)作為(wéi)常規(guī)PCR儀使(shǐ)用。
Corbett的Rotor-Gene也(yě)是(shì)離(lí)心(xīn)式的定量PCR儀。在品牌的角度上Corbett當然不如(rú)Roche羅氏在(zài)國(guó)內那(nà)樣*，之(zhī)所以特(tè)別(bié)提到這(zhè)個產品，確(què)實是(shì)因(yīn)為(wéi)Corbett的設計(jì)有(yǒu)獨到之處。比如Corbett的Rotot-Gene3000標(biāo)準型是真正(zhèng)獨立(lì)的(dí)4通道(可(kě)建立新(xīn)通道)，4個獨立(lì)LED激(jī)發光(guāng)源(yuán)(470nm/ 530nm/585nm/625nm)保證(zhèng)zui少的光(guāng)譜交(jiāo)叉 (<1 %)。PMT檢(jiǎn)測，6個檢(jiǎn)測濾光片，可檢測(cè)熒光包括(kuò)FAM/SYBR Green I, TET，VIC/JOE，HEX，Max， NED/ TAMRA/ Cy3, ROX/Texas Red,和(hé)Cy5，Cy5.5等等，機器的適用(yòng)性(xìng)非常寬(kuān)，開放的試劑係統使得機器(qì)可適用Taqman探(tàn)針，熒光(guāng)染(rǎn)料(liào)SYBR Green I檢(jiǎn)測，分子信標，FRET探(tàn)針(zhēn)，Amplifluor探針等等，不像某些(xiē)牌(pái)子(zǐ)的(dí)定(dìng)量PCR儀(yí)隻(zhī)能(néng)適用Taqman法和熒光染料檢(jiǎn)測(cè)。Rotot-Gene3000靈敏(mǐn)度(dù)高，寬達12個(gè)數量級(jí)的(dí)綫(xiàn)性範(fàn)圍，可正確區(qū)分1，2，3拷(kǎo)貝(bèi)的(dí)基(jī)因，重復(fù)性(R>0.99935)。由(yóu)於(yú)轉(zhuǎn)子在反應(yīng)過程之(zhī)中一(yī)直以(yǐ)恒定的低速旋轉(zhuǎn)，使得樣品間(jiān)的溫度均一性(±0.01℃/秒(miǎo))，同一熱反(fǎn)應(yīng)室提供*相(xiāng)同的(dí)反應條件(jiàn)，同(tóng)一(yī)光學通(tōng)路提供(gōng)*相同(tóng)的測(cè)量通道，每標(biāo)本(běn)每循(xún)環檢測32次(cì)，滿(mǎn)足(zú)高(gāo)精(jīng)度和一致性要(yào)求。Rotot-Gene3000提供了36 x0.2ml和(hé)72x0.1ml兩(liǎng)種(zhǒng)轉子(zǐ)，檢測(cè)是通過薄(báo)壁管側壁而非(fēi)管底進(jìn)行(háng)的，因而可以(yǐ)使用普(pǔ)通的(dí)0.2ml PCR管，並(bìng)允許在試(shì)管蓋(gài)上(shàng)標記，這(zhè)降(jiàng)低了使用(yòng)成本。Rotot-Gene3000的溫控速度不如LightCycler，但(dàn)優於多數的固(gù)定加熱模塊(kuài)的機(jī)型(xíng)，能達(dá)到(dào)5℃/秒(管(guǎn)內實際升溫速度達到2.5℃/秒)。Corbett還有(yǒu)一個(gè)光(guāng)學變(biàn)性(xìng)——讓待擴增樣(yàng)品預先進行一次熔解曲(qū)綫(xiàn)程序，檢測(cè)熒(yíng)光(guāng)染料信(xìn)號大小的變(biàn)化(huà)，找到代(dài)表全(quán)部雙鏈DNA解(jiě)鏈的峰值對應溫度(dù)，在其後(hòu)的(dí)反應(yīng)中(zhōng)就無(wú)需(xū)總是(shì)將(jiāng)變性溫度設為94度，也不需要(yào)延長孵育時間。這個使得反(fǎn)應過程大大縮短。Rotot-Gene主要的(dí)問(wèn)題也是可容(róng)納(nà)的(dí)樣(yàng)品數量少，隻(zhī)能(néng)靠反應(yīng)速(sù)度快，同樣(yàng)的(dí)時間可以多運行(háng)幾輪(lún)反(fǎn)應來(lái)彌補(bǔ)。對(duì)於大(dà)量(liáng)樣品(pǐn)的實驗(yàn)室(shì)，Corbett同時還(huán)提供(gōng)定量PCR反應(yīng)自(zì)動(dòng)加樣(yàng)係統，不(bù)單(dān)可以和自(zì)家的(dí)Rotor-Gene配(pèi)套使用提高工(gōng)作效(xiào)率和均一(yī)性，安全性，也(yě)可(kě)以配(pèi)套Roche和ABI的(dí)定量(liáng)PCR儀(yí)。這樣就(jiù)不用(yòng)擔(dān)心(xīn)加樣(yàng)累(léi)壞了。
3.第三(sān)類的(dí)熒光(guāng)定(dìng)量(liáng)pcr儀以cepher公司(sī)的(dí)smart cyclerii為代表(biǎo)，對(duì)於國內的用戶來說(shuō)比(bǐ)較新鮮，但(dàn)這(zhè)個一(yī)直(zhí)受美(měi)國(guó)國(guó)防部(bù)和安全局，美國*傳染(rǎn)病(bìng)醫學研究(jiū)中心(xīn)，美國*士兵和(hé)生物化學(xué)合作(zuò)所資(zī)助的(dí)公(gōng)司卻(què)相當有(yǒu)來(lái)頭。smart%20cyclerii獲得過1998年(nián)美國(guó)研(yán)發r&d100金(jīn)獎(jiǎng)。Smart cyclerii的機型小巧，隻(zhī)有16個樣品槽(cáo)，它的獨到之處在(zài)於(yú)這(zhè)16個樣品槽分別擁有獨立(lì)的智能(néng)升降溫模塊，也就是(shì)說這16個(gè)樣品槽相當於16個獨(dú)立(lì)的(dí)定量(liáng)pcr儀(yí)！獨立(lì)控溫的好處(chǔ)首先是，你可以在同(tóng)一定量pcr儀上分別(bié)進行不(bù)同(tóng)條件(jiàn)的定量pcr反應，更(gēng)為(wéi)靈活自定義的梯(tī)度(dù)優化(huà)反應也好(hǎo)，或者是(shì)*不(bù)同的(dí)幾組(zǔ)反應(yīng)——甚至，你可(kě)能隻(zhī)進(jìn)行個別(bié)樣品的檢測，隻(zhī)占(zhān)用其中幾(jī)個(gè)樣品槽——過(guò)一會兒(ér)其它(tā)的(dí)同(tóng)事也(yě)要用——他(tā)不需要等待(dài)你的反應(yīng)結束，而可以隨時利用空置的樣(yàng)品槽(cáo)開始其它定量反應！對(duì)於各有各忙的(dí)多成員(yuán)的(dí)實(shí)驗室，要(yào)是個別樣品就占據96孔(kǒng)樣品(pǐn)槽，其它人(rén)每(měi)輪要再(zài)等(děng)2個多小(xiǎo)時，有時還要等(děng)幾輪，那(nà)可夠鬱悶(mèn)的。smart cyclerii的使(shǐ)用頻(pín)率(shuài)可以被(bèi)zui大(dà)化(huà)，大家(jiā)都不用(yòng)等待！這個世界上(shàng)*允許(xǔ)不同條件pcr同時進行的(dí)定量pcr儀擁有*的優點，是其(qí)它任何平板(bǎn)式(shì)或者(zhě)離心式定(dìng)量(liáng)pcr都(dū)不具備的。
此(cǐ)外，每個溫控模(mó)塊隻(zhī)控製(zhì)一(yī)個(gè)樣品槽(cáo)，升降溫速度當(dāng)然(rán)更快(kuài)——高(gāo)達10℃/秒，控(kòng)溫精度(dù)自然就(jiù)更(gēng)高——這*本不用考慮(lǜ)不(bù)同(tóng)樣品(pǐn)槽(cáo)之(zhī)間(jiān)的(dí)溫度均一(yī)性的(dí)問題，隻有每(měi)個模塊控(kòng)溫(wēn)度的問題。對於普(pǔ)通的96孔板固定加熱(rè)模塊，本身有控溫精(jīng)度和準確(què)度的差(chà)異，再加上樣(yàng)品槽不(bù)同位(wèi)置(zhì)之(zhī)間(jiān)的溫度(dù)差(chà)異，而(ér)Smart CyclerII就*減少(shǎo)了一(yī)個(gè)誤差因素。優異的(dí)特性使(shǐ)得(dé)隻(zhī)要20分(fēn)鐘(zhōng)就可(kě)以完(wán)成(chéng)常規(guī)的(dí)定量PCR反應，大(dà)大(dà)提高(gāo)研(yán)究人(rén)員的工作(zuò)效率。每個(gè)模(mó)塊獨立控(kòng)製(zhì)的激發光(guāng)源和檢測(cè)器(qì)直(zhí)接(jiē)與反應(yīng)管(guǎn)壁(bì)接(jiē)觸(chù)，保證熒光激發(fā)和檢測不(bù)受外界(jiè)幹(gān)擾(rǎo)，固定的結(jié)構使得儀器(qì)運(yùn)行(háng)更(gēng)穩定，使用壽(shòu)命更長(cháng)。整(zhěng)合(hé)有(yǒu)4通道光(guāng)學(xué)檢測係統(tǒng)，分別(bié)可以檢測FAM/SYBR Green I, Tet/ Cy3, Texas Red和(hé)Cy5，可在同一(yī)樣本中進行(háng)多(duō)靶(bǎ)點(diǎn)分(fēn)析，同時(shí)檢測(cè)4種熒(yíng)光信(xìn)號，可(kě)使(shǐ)用(yòng)多(duō)種檢(jiǎn)測(cè)方法，包括(kuò)Taqman探(tàn)針，分子信標，Amplifluor引物(wù)和Scorpion引物(wù)和熒光內插染(rǎn)料等(děng)等。寬(kuān)達(dá)9個數量級(jí)的綫(xiàn)性(xìng)範(fàn)圍(wéi)。
不過Smart CyclerII需(xū)要(yào)使用*的扁平反(fǎn)應管，增加了反應成本，上(shàng)樣也(yě)不如傳(chuán)統(tǒng)的方法方(fāng)便，而且16個(gè)樣品槽(cáo)也(yě)不大適(shì)合批量反應的(dí)要求(qiú)——不過(guò)Smart Cycler II的軟件設(shè)計(jì)允許(xǔ)一(yī)台電腦(nǎo)同時操(cāo)作6台Smart Cycler II，部分彌補(bǔ)了(liǎo)缺憾(hàn)。所(suǒ)以Smart Cycler II會更(gēng)適合(hé)多成員，樣本量(liáng)不大，要求(qiú)快速出結(jié)果的實驗(yàn)室(shì)。不(bù)是每(měi)個實驗(yàn)室都總是要同(tóng)時(shí)檢測幾(jī)十上(shàng)百(bǎi)個(gè)樣(yàng)品吧？
在選(xuǎn)購定(dìng)量PCR前之前我(wǒ)們(mén)需要(yào)先了解自己(jǐ)的需(xū)要——是同(tóng)時(shí)檢測(cè)大(dà)量(liáng)樣本(běn)？還是(shì)小規(guī)模的研究(jiū)？是(shì)固定(dìng)的標準化檢測方法還(huán)是有(yǒu)機會(huì)嘗試不同的方法？隨著(zhuó)技(jì)術(shù)的(dí)加速(sù)發(fā)展(zhǎn)不斷有(yǒu)新的(dí)熒(yíng)光素(sù)，標記方法和試劑(jì)盒麵(miàn)市(shì)，還(huán)要考慮(lǜ)儀器(qì)性能在(zài)將(jiāng)來的(dí)可(kě)拓(tuò)展性等(děng)等。撰寫本文(wén)的目的並(bìng)非指出(chū)哪一類的(dí)儀器更(gēng)適合我們的需(xū)要——畢(bì)竟不(bù)同應(yīng)用領(lǐng)域，不(bù)同的實(shí)驗室有著不(bù)同的(dí)需求(qiú)，所(suǒ)以了解不同類型(xíng)的(dí)定量PCR儀的特(tè)點(diǎn)有(yǒu)助於(yú)選(xuǎn)擇(zé)更(gēng)適(shì)合自己(jǐ)需(xū)要的儀(yí)器，“不求，但求適合(hé)"。